每當(dāng)購(gòu)買一根新色譜柱時(shí)，活化沖洗是一個(gè)必須操作的步驟。

全新色譜柱一般都是保存在一定的保護(hù)液中的。活化的目的是將新柱中的封存液替換，并且沖洗掉色譜柱中的雜質(zhì)。還可以排除色譜柱中有機(jī)溶液的揮發(fā)所產(chǎn)生的氣泡殘留，發(fā)揮色譜柱的效能。不僅如此，活化還能使色譜柱內(nèi)硅膠上的鍵合基團(tuán)達(dá)到更好的排列，有利于樣品的分離。

Kromasil色譜柱根據(jù)不同固定相情況，推薦以下活化方法，其他品牌色譜柱需要在咨詢廠商技術(shù)工程師確認(rèn)后進(jìn)行參考。

1、反相色譜柱（C18、C8、Phenyl、PhenylHexyl等）

①    80%甲醇（乙腈）-水溶液，低流速?zèng)_洗20-30個(gè)柱體積；

②    50%甲醇（乙腈）-水溶液，低流速?zèng)_洗20-30個(gè)柱體積；

③    初始比例流動(dòng)相平衡10-30個(gè)柱體積。

*若流動(dòng)相中含有緩沖鹽，則需要在步驟③中采用無緩沖鹽的初始比例流動(dòng)相進(jìn)行平衡后，額外增加步驟④使用含有緩沖鹽得初始比例流動(dòng)相平衡10-30個(gè)柱體積。

2、正相色譜柱（SIL、NH、CN等）

①    流動(dòng)相平衡20-30個(gè)柱體積；

*若需要在反相條件下使用氨基、氰基等固定相的正相柱，需要參照以下步驟執(zhí)行：

①    100%異丙醇溶液沖洗50-100個(gè)柱體積；

②    初始比例流動(dòng)相平衡20-30個(gè)柱體積。

3、HILIC色譜柱（HILIC-D等）

①    50%乙腈-水溶液沖洗50個(gè)柱體積；

②    初始比例流動(dòng)相平衡10-20個(gè)柱體積。

注意：任何含有緩沖鹽的流動(dòng)相都需要在無緩沖鹽的初始比例流動(dòng)相充分平衡后方才使用含有緩沖鹽得溶液進(jìn)行平衡，否則將出現(xiàn)鹽析等不可逆色譜柱損害。并且，在進(jìn)行色譜柱活化及使用時(shí)需要反復(fù)確認(rèn)溶液間的互溶性。

以下為常見Kromasil色譜柱出廠封存溶液參考

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鯤霆生物現(xiàn)為Nouryon旗下品牌Kromasil液相色譜柱及制備填料中國(guó)區(qū)總代理。主營(yíng)業(yè)務(wù)為代理銷售各類實(shí)驗(yàn)室精密儀器、試劑耗材以及相關(guān)領(lǐng)域的技術(shù)開發(fā)與咨詢服務(wù)。
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